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    上海研域生物原代細胞凍存和復蘇?檢測方法包括以下步驟

    發(fā)布時(shí)間: 2024-05-28  點(diǎn)擊次數: 389次

    我們知道,在原代細胞培養檢測實(shí)驗在實(shí)驗儀器等工作上都要耗費不少的人力和體力。好在很久以前就有高人發(fā)明了原代細胞保存這個(gè)實(shí)驗步驟,將暫時(shí)多出來(lái)的原代細胞冰凍保存,保存細胞活力。


    原代細胞復蘇是一個(gè)簡(jiǎn)單的試驗操作,但操作中也有許多需要注意的事項,在實(shí)驗操作中注意細小的問(wèn)題,才能使復蘇后的細胞保持良好的狀態(tài),針對原代細胞復蘇應該注意以下幾點(diǎn):

    1. 可以提前把需要的體積的培養液放到培養瓶里,擰松瓶蓋,放到孵箱里30分鐘--1個(gè)小時(shí); 

    2. 為防止凍存管在升溫時(shí)出現爆裂等情況,可以在放入水浴前就把超凈臺里的蓋子擰松一下然后再擰上;

    3. 水浴溫度37℃左右。


    一、慢凍程序

    1.  標準程序:采用細胞凍存器

    當溫度在-25 ℃以上時(shí),1~2 ℃/min;

    當溫度達-25 ℃以下時(shí),5~10 ℃/min;

    當溫度達-100℃時(shí),可迅速放入液氮中。

    2.  簡(jiǎn)易程序:將冷凍管(管口要朝上)放入紗布袋內,紗布袋系以線(xiàn)繩,通過(guò)線(xiàn)繩將紗布袋固定于液氮罐罐口,按每分鐘溫度下降1~2 ℃的速度,在40 min內降至液氮表面過(guò)夜,次日早晨投人液氮中。

    3.  傳統程序:冷凍管置于4℃ 10 分鐘→ -20℃ 30 分鐘→ -80℃ 16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽長(cháng)期儲存。


    二、低溫保護劑的應用

    在細胞凍存時(shí)加入溫保護劑,能大大提高凍存效果。

    常用的低溫保護劑是DMSO,它是一種滲透性保護劑,可迅速透入細胞,提高胞膜對水的通透性,降低冰點(diǎn),延緩凍結過(guò)程,能使細胞內水分在凍結前透出細胞外,在胞外形成冰晶,減少胞內冰晶,從而減少冰晶對細胞的損傷。


    三、保存細胞的復蘇方法

    1.  快速解凍

    凍存細胞從液氮中取出后,立即放入37℃水浴中,輕輕搖動(dòng)冷凍管,使其在1 分鐘內全部融化(不要超過(guò)3 分鐘)。

    2.  解凍后的細胞可直接接種到生長(cháng)培養液的細胞培養瓶中直接進(jìn)行培養,24小時(shí)后再用新鮮培養液替換舊培養液,以去除DMSO。

    3.  如果細胞對冷凍保護劑特別敏感

    解凍后的原代細胞應先通過(guò)離心去除冷凍保護劑,然后再接種到生長(cháng)培養液的培養瓶中。


    上海研域生物應保證清潔,整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標板不接觸次氯酸,并可以使實(shí)驗中用到的“花板"降至限度。從而提高檢測的特異性,并得到更準確、可靠的實(shí)驗結果。

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