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    上海研域生物細胞珠免疫熒光速度快的特點(diǎn)

    發(fā)布時(shí)間: 2024-06-25  點(diǎn)擊次數: 209次

    細胞株免疫熒光主要用于蛋白定位研究和細胞內信號轉導,細胞免疫熒光技術(shù)是利用免疫技術(shù)和熒光標記技術(shù)相結合,原理就是利用抗原-抗體反應之后,采用熒光標記,標記完成后,顯微鏡下觀(guān)察細胞內某種抗原成分的多少。


    從而做出一個(gè)定位研究,也可以為細胞內信號傳導提供一個(gè)明確的指導,細胞免疫熒光具有敏感性強、特異性高、速度快的特點(diǎn),是目前比較常用的組織學(xué)技術(shù),也是比較準確的。

    一、實(shí)驗方法原理

    在進(jìn)行細胞免疫熒光過(guò)程中,需要用到細胞爬片,通過(guò)將爬片浸在細胞培養基內,細胞在爬片上生長(cháng),進(jìn)而進(jìn)行細胞的免疫熒光。

    二、實(shí)驗材料

    1. 細胞樣品。

    2. 試劑、試劑盒:多聚甲醛 70%甲醇 丙酮 PBS Triton  BSA DAPI染液 DABCO Tris 甘油。

    3. 儀器、耗材:玻片。


    三、細胞株爬片免疫熒光實(shí)驗步驟

    1. 在培養板中將已爬好細胞的玻片用PBS浸洗3次,每次3min。

    2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min, PBS浸洗玻片3次,每次3min。

    3. 0.5%Triton X-100(PBS配制)室溫通透20min(細胞膜上表達的抗原省略此步驟)。

    4. PBS浸洗玻片3次,每次3min,吸水紙吸干PBS,在玻片上滴加正常山羊血清,室溫封閉30min。

    5. 吸水紙吸掉封閉液,不洗,每張玻片滴加足夠量的稀釋好的一抗并放入濕盒,4℃孵育過(guò)夜。

    6. 加熒光二抗: PBST 浸洗爬片3次,每次3min,吸水紙吸干爬片上多余液體后滴加稀釋好的熒光二抗,濕盒中20-37℃孵育1h,PBST浸洗切片3次,每次3min。注意:從加熒光二抗起,后面所有操作步驟都盡量在較暗處進(jìn)行。

    7. 復染核:滴加DAPI避光孵育5min,對標本進(jìn)行染核,PBST 5minx4次洗去多余的DAPI。

    8. 用吸水紙吸干爬片上的液體,用含抗熒光淬滅劑的封片液封片,然后在熒光顯微鏡下觀(guān)察采集圖像。


    注意事項

    1.取細胞株爬片時(shí),動(dòng)作應輕柔,防止將細胞爬片夾碎,影響實(shí)驗進(jìn)程。

    2.種細胞過(guò)程中,要注意將細胞輕柔混勻,“八"字或者“十"字形搖晃,防止細胞局部生長(cháng)過(guò)密。


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